禽坦布苏病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

编号 zgly0001534787

文献类型 期刊论文

文献题名 禽坦布苏病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者 万春和  陈翠腾  傅秋玲  程龙飞  傅光华  陈红梅  施少华  黄瑜 

作者单位 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2016年08期

年份 2016 

分类号 S852.65 

关键词 禽坦布苏病毒  NS1基因  TaqMan  实时荧光定量PCR方法 

文摘内容 【目的】建立禽坦布苏病毒（Avian Tembusu virus,ATmV）TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。【方法】根据ATmV非结构蛋白NS1的基因特征,设计特异性的引物和探针,建立基于TaqMan探针检测ATmV的实时荧光定量PCR检测方法,对其特异性、重复性进行检测。用建立的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法和之前建立的RT-PCR方法同时对临床15份疑似ATmV感染的病料进行检测,计算其符合率。【结果】成功建立了检测ATmV的实时荧光定量PCR检测方法,当NS1基因含量为（2.67×102）2.67×107拷贝/μL时有良好的线性扩增,其扩增相关系数为0.998,扩增效率为99.9%。建立的ATmV实时荧光定量PCR检测方法敏感度高,最低检测限为2.67×102拷贝/μL;特异性强,对水禽常见病毒（如Ⅰ型鸭肝炎病毒、新型鸭呼肠孤病毒、禽流感病毒、禽Ⅰ型副粘病毒与番鸭细小病毒等）检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.39%1.17%和0.51%1.82%。对临床送检的15份病料,TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的阳性率为73.33%（11/15）,RTPCR方法的阳性率为60.0%（9/15）,2种方法的符合率为100.0%。【结论】建立了基于TaqMan探针的ATmV实时荧光定量PCR检测方法,该方法可应用于ATmV感染的早期检测。