稳定表达流感病毒PR8株NS1蛋白MDCK细胞系的建立

编号 zgly0001400764

文献类型 期刊论文

文献题名 稳定表达流感病毒PR8株NS1蛋白MDCK细胞系的建立

作者 张旭  滕巧泱  闫丽萍  周洁文  徐大伟  颜丕熙  姬希文  戴晓光  王洪斌  高利  李泽君 

作者单位 中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫重点开放实验室  东北农业大学动物医学学院 

母体文献 中国动物传染病学报 

年卷期 2011年02期

年份 2011 

分类号 S852.659.5 

关键词 流感病毒  NS1基因  MDCK 

文摘内容 根据流感病毒A/Puerto Rico/8/34株NS1基因的核苷酸序列设计引物,PCR扩增后,将NS1完整开放阅读框分别克隆于pMX载体和PET30a载体,成功构建了pMX-PR8-NS1和PET-PR8-NS1重组质粒。将PET-PR8-NS1重组质粒转化Jm109感受态大肠杆菌,诱导表达获得重组NS1蛋白免疫小鼠制备多抗血清。同时,将逆转录病毒载体系统pMX-PR8-NS1、pCI-NF-KB、PMDSV和MDSV共转染293T细胞,制备逆转录病毒样粒子。将逆转录病毒样粒子感染MDCK细胞,利用嘌呤霉素进行抗性筛选。然后经过PCR、RT-PCR、间接免疫荧光鉴定,获得稳定表达PR8病毒NS1蛋白的细胞系,将之命名为MDCK-PR8-NS1细胞系。该细胞系的建立有望为深入开展流感病毒NS蛋白生物学功能的研究以及为扩增NS1基因删除的流感病毒提供了有利的工具。