黑曲霉pepD基因阻断突变菌株的构建及功能分析

编号 zgly0001305370

文献类型 期刊论文

文献题名 黑曲霉pepD基因阻断突变菌株的构建及功能分析

作者 赵春田  彭远义  唐国敏  王敖全  王华明 

作者单位 中国科学院微生物研究所微生物资源前期开发国家重点实验室  西南农业大学动物科技学院  Genencor International Inc.  PaloAlto  California 北京100080西南农业大学动物科技学院重庆400716  重庆400716  北京100080  94304  USA 

母体文献 菌物学报 

年卷期 2005年03期

年份 2005 

分类号 Q939.97 

关键词 同源重组  外源蛋白  分泌表达 

文摘内容 运用同源重组技术破坏了黑曲霉基因组中的pepD基因,该基因编码一种类subtilisin的胞外蛋白酶PEPD。实验以黑曲霉GICC2773基因组DNA为模板,PCR扩增pepD基因,并在此基因中间插入潮霉素抗性基因(hph)表达单元,由此产生了3.7kb的pepD阻断基因片段。将此阻断基因片段与载体pBS连接,构建成pepD基因阻断质粒pBSDH。采用原生质体-CaCl2/PEG法将酶切阻断质粒得到的含pepD基因和hph表达单元的3.7kb线性片段转化AspergillusnigerGICC2773菌株,在含潮霉素的平板上筛选潮霉素抗性转化子,从这些抗性转化子中经PCR检测分离到到1个pepD基因阻断突变菌株?pepD66。外源漆酶分泌活性分析显示,黑曲霉pepD基因的破坏使其外源漆酶的分泌表达有所提高。