正交设计优化星星草ISSR-PCR反应体系研究

编号 zgly0001313804

文献类型 期刊论文

文献题名 正交设计优化星星草ISSR-PCR反应体系研究

作者 沙伟  滕兆岩  倪红伟 

作者单位 齐齐哈尔大学生命科学与工程学院  黑龙江省科学院自然资源研究所 黑龙江齐齐哈尔161006  黑龙江齐齐哈尔161006  黑龙江哈尔滨150000 

母体文献 中国草地学报 

年卷期 2006年06期

年份 2006 

分类号 S543.9 

关键词 星星草  ISSR  正交设计  PCR反应  体系优化 

文摘内容 采用正交设计法优化适合于星星草的ISSR体系,对影响ISSR—PCR的多个因素,包括引物浓度、Taq酶的用量、Mg2+和dNTP浓度进行了比较、优化;同时又对DNA模板浓度,PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进行了筛选。结果确定了星星草ISSR—PCR反应体系的最佳方案为:PCR扩增程序,94℃预变性5min;进行40个循环的94℃变性45s,55℃复性45 s,72℃延伸2 min;72℃延伸10 min,4℃保存。20μl反应体系包括10%buffer 2μl、模板DNA60ng、dNTP 100μmol/L、TaqDNA聚合酶1.5U、引物0.8mmol/L、Mg2+2.0mmol/L。