传染性支气管炎N基因克隆及在大肠杆菌中的可溶性表达

编号 zgly0001383370

文献类型 期刊论文

文献题名 传染性支气管炎N基因克隆及在大肠杆菌中的可溶性表达

作者 呼延蓉  郭伟伟  李明义  黄保续 

作者单位 东北农业大学动物医学院  青岛易邦生物工程有限公司  中国动物卫生与流行病学中心 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2010年04期

年份 2010 

分类号 S852.65 

关键词 鸡传染性支气管炎病毒(IBV)  核蛋白基因  克隆  可溶性表达 

文摘内容 核衣壳蛋白(N)是鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的重要结构蛋白。根据GenBank报道的IBV的M41株的N基因序列设计一对引物,从提取的M41株的RNA中利用RT-PCR技术扩增获得了约1.23kb的片段,将该片段插入克隆载体pMD18-T,经测定核苷酸序列证实N基因扩增正确,表明已成功构建pMD18-T-N。再将pMD18-T-N用BamHⅠ和HindⅢ双酶切,将酶切后的N基因片段克隆到表达载体pET-32a,转化入大肠杆菌Rossetta中,用IPTG诱导,进行SDS-PAGE电泳,电泳结果显示外源基因获得了表达且为可溶性蛋白,Western-blotting检测表明N蛋白可与相应IBV病毒抗体发生特异性的反应,表明N蛋白有一定的生物活性,可为用于生产检测IB的诊断试剂和研制新型IB重组亚单位疫苗奠定基础。