密旋链霉菌Act12中四氢嘧啶合成基因簇的鉴定及其功能分析

编号 zgly0001548644

文献类型 期刊论文

文献题名 密旋链霉菌Act12中四氢嘧啶合成基因簇的鉴定及其功能分析

作者 高波  马怡茗  洪煜  舒伟学  薛泉宏  颜霞  颜华  贾良辉 

作者单位 西北农林科技大学生命科学学院  西北农林科技大学资源环境学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2017年06期

年份 2017 

分类号 S476.1 

关键词 链霉菌  相容性溶质  四氢嘧啶  ectABC基因簇 

文摘内容 【目的】对生防密旋链霉菌Act12中的四氢嘧啶合成基因簇进行鉴定及功能分析。【方法】对田间生防效果良好的密旋链霉菌Act12进行盐耐受能力检测,采用体积分数80%的乙醇抽提其胞内四氢嘧啶,分别通过TLC和HPLC进行定性及定量检测四氢嘧啶。通过Act12全基因组分析,克隆得到Act12中四氢嘧啶生物合成基因簇ectABC,将其与表达载体pET-28a连接,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,检测工程菌株的盐耐受能力。【结果】密旋链霉菌Act12可在NaCl质量分数为0%~10.0%的条件下生长,且能够生产相关耐盐相容性溶质四氢嘧啶。当NaCl质量分数为2.5%时,密旋链霉菌Act12胞内的四氢嘧啶积累量达到最大值,为72.39mg/L。生物信息学分析结果表明,组成ectABC基因簇的3个基因ectA、ectB、ectC位于同一个操纵子上,分别编码二氨基丁酸乙酰基转移酶、二氨基丁酸氨基转移酶和四氢嘧啶合成酶。通过克隆得到长2 408bp的ectABC基因簇,并使其成功在大肠杆菌中实现异源表达,通过Ni柱纯化得到了EctA蛋白。但含pET28a-ectABC的大肠杆菌BL21(DE3)在本试验条件下,其盐耐受能力并无明显改善。【结论】生防链霉菌Act12中存在四氢嘧啶合成基因簇ectABC,且能够在大肠杆菌中成功异源表达。