甘露糖正向筛选体系的建立及在拟南芥遗传转化中的应用

编号 zgly0001371359

文献类型 期刊论文

文献题名 甘露糖正向筛选体系的建立及在拟南芥遗传转化中的应用

作者 杨彩云  尹伟伦  夏新莉 

作者单位 北京林业大学生物科学与技术学院林木育种国家工程实验室 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2009年06期

年份 2009 

分类号 Q943.2 

关键词 磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因  甘露糖  AmCBL1  遗传转化  拟南芥 

文摘内容 为了研究甘露糖正向筛选体系在拟南芥转化中的有效性,本研究参照GenBank上公布的PMI基因序列,通过PCR从大肠杆菌克隆了6-磷酸甘露糖异构酶(6-phosphomannose isomerase,PMI)基因,替换植物表达载体pCAMBIA1301中的潮霉素磷酸转移酶(hygromycin phosphotransferase,HPT)基因,并将以CaMV35S和AmCBL1P两种启动子调控的沙冬青AmCBL1基因成功地构建到重组载体pPMI上,并导入根癌农杆菌E-HA105中,然后通过农杆菌花序浸染法转入拟南芥。将获得的阳性植株通过GUS组织化学法鉴定、氯酚红(chlorophenol red,CPR)法及PCR检测,证明PMI基因已经转入拟南芥中。在不使用抗生素和除草剂的情况下这种筛选体系为转基因拟南芥筛选提供了更加安全有效的方法,并且为以后AmCBL1基因的功能验证及植物抗逆性的改良奠定了基础。