家蝇抗菌肽Defensin基因同向串联表达载体的构建和鉴定

编号 zgly0000409112

文献类型 期刊论文

文献题名 家蝇抗菌肽Defensin基因同向串联表达载体的构建和鉴定

学科分类 220.3020;森林昆虫学

作者 王婷婷  金小宝  朱家勇  刘雷山 

作者单位 广东医学院  广东药学院病原生物学教研室 

母体文献 生物技术 

年卷期 2006,16(2)

页码 3-5

年份 2006 

分类号 Q963 

关键词 家蝇  抗菌肽  Defensin基因  同向串联  多拷贝 

文摘内容 目的: 构建家蝇抗菌肽Defensin基因多拷贝串联体, 并克隆到甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K上。方法: PCR法扩增家蝇抗菌肽Defensin基因成熟肽片断, 目的片断的上游5′端带有EcoR Ⅰ和Nhe Ⅰ位点, 下游5′端带有Not Ⅰ和Xba Ⅰ位点, 目的片断首先克隆入pMD18-T载体, 利用pMD18-T载体的NdeⅠ位点和目的片断上的一对同尾酶(NheⅠ和XbaⅠ), 多次酶切连接, 串联成多拷贝的Defettsin成熟肽基因, 再用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切, 最后克隆人甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K。结果: PCR鉴定、酶切鉴定和DNA测序证明多拷贝基因重组质粒构建成功。结论: 该方法能方便高效地获得所需的多拷贝基因, 为进一步进行高效表达打下基础。