雷公藤RNA提取方法选择与优化

编号 zgly0000831294

文献类型 期刊论文

文献题名 雷公藤RNA提取方法选择与优化

作者 陈欣  祝传书  冯俊涛  张兴 

作者单位 西北农林科技大学 

母体文献 西北林学院学报 

年卷期 2014(2)

页码 112-116

年份 2014 

分类号 S722.33 

关键词 雷公藤  RNA提取  SDS法  方法优化 

文摘内容 建立提取完整性好、丰度高的雷公藤RNA的方法, 是后续分子生物学试验的必要前提。试验以雷公藤叶、根、愈伤组织和悬浮细胞为材料, 比较亚精胺法、SDS法、CTAB法和异硫氰酸胍法从雷公藤组织中提取的RNA, 并对最佳方法进行优化。结果表明: SDS法从雷公藤组织中获得RNA片段完整性较好, 但丰度较低; 对该方法的操作步骤进行删减, 并在2次氯仿/异戊醇去除蛋白质和多糖的过程中进行不同时间和程度的振荡提取, 得到的RNA较优化前丰度更高, 完整性更好, 28SrRNA条带的亮度约为18SrRNA条带亮度的2倍, 经过紫外分光光度计测定A260/A280比值在1.8～2.0之间, A260/A230比值在1.9～2.1之间。用优化的SDS法提取的雷公藤各组织RNA均具有很好的反转录活性, 完全能满足后续RT-PCR、全长基因的克隆和Northernblotting分析等分子生物学研究。