苜蓿基因组DNA提取和RAPD反应条件优选

编号 zgly0001236280

文献类型 期刊论文

文献题名 苜蓿基因组DNA提取和RAPD反应条件优选

作者 袁庆华  桂枝  张文淑 

作者单位 中国农业科学院畜牧研究所!北京100094  甘肃农业大学!兰州730070 

母体文献 草地学报 

年卷期 2001年02期

年份 2001 

分类号 Q943 

关键词 苜蓿  DNA提取方法  RAPD  反应条件 

文摘内容 采用 CTAB法、N2 — SDS法、SDS法和改进的 CTAB法 ,提取苜蓿基因组 DNA ,比较其分离效果。结果表明 ,改进的 CTAB法为最佳提取法。对 RAPD反应程序中的一些重要参数进行摸索和优化试验 ,建立适合苜蓿RAPD分析应用的体系组成为 :反应液总体积 2 5μL ,174ng/μL模板 DNA ,2 .5μL 10 x反应缓冲液 ,10碱基引物浓度 0 .1μm ol/ L ,Taq DNA聚合酶 1U ,d NTP浓度 0 .3 mm ol/ L ,Mg2 + 浓度 2 .5 m mol/ L。 PCR反应循环为 :94℃4min,36℃ 30 s,72℃ 1min;94℃ 30 s,36℃ 30 s,72℃ 1m in,45个循环 ;72℃延伸 10 min