稻瘟病菌两个效应蛋白基因原核表达和瞬时表达载体构建

编号 zgly0001634573

文献类型 期刊论文

文献题名 稻瘟病菌两个效应蛋白基因原核表达和瞬时表达载体构建

作者 刘艳琴  王一  杨静  李成云 

作者单位 云南生物资源保护与利用国家重点实验室云南农业大学植物保护学院 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2018年09期

年份 2018 

分类号 S435.111.41 

关键词 稻瘟病菌  原核表达载体  瞬时表达载体  效应蛋白 

文摘内容 为了研究稻瘟病菌效应蛋白基因功能,本研究构建了稻瘟病菌效应蛋白基因BAS1和BAS4与3×FLAG标签融合的原核表达载体及其与GFP融合的瞬时表达载体。以持有BAS1和BAS4基因的稻瘟病菌株的cDNA为模板,RT-PCR扩增目的基因BAS1和BAS4编码区,选用p3×FLAG-CMV-10为模板扩增3×FLAG基因,分别将BAS1和BAS4与3×FLAG连接到原核表达载体p GEX-4T-1中,获得原核表达载体p GEX-BAS1-3×FLAG和p GEX-BAS4-3×FLAG,测序结果表明克隆到的BAS1、BAS4和3×FLAG序列及连接方向正确。将构建好的原核表达载体转化到表达感受态细胞Transetta(DE3)中得到转化子,利用IPTG诱导表达原核表达产物,SDS-PAGE电泳结果表明,目的蛋白约为40 kD,与理论值相符。为了进一步研究BAS1和BAS4的亚细胞定位,利用同源重组方法构建了pBWA(V)HS-BAS1-GLosgfph和pBWA(V)HS-BAS4-GLosgfp瞬时表达载体。本研究所构建的BAS1和BAS4与3×FLAG融合的原核表达载体及瞬时表达载体将为进一步研究BAS1和BAS4功能及定位提供一定的实验基础。