林木RAPD分析及实验条件的优化

编号 zgly0000187184

文献类型 期刊论文

文献题名 林木RAPD分析及实验条件的优化

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 尹佟明  韩正敏  黄敏仁 

作者单位 南京林大林木遗传与基因工程国家林业局重点实验室 

母体文献 南京林业大学学报 

年卷期 1999, 23(4)

页码 7～12

年份 1999 

分类号 S718.464 

关键词 分子标记  RAPD分析  优化  竹类植物  木本植物 

文摘内容 对影响RAPD实验因素进行分析和探讨, 确定一个针对林木进行RAPD分析
的实验程序。实验材料为马尾松种子的胚乳、杨树叶片、竹叶、杨树黑斑病
原真菌、湿地松新梢。介绍了实验中缓冲液组成。该缓冲液可在利用玻璃毛
细管和印管进行扩增反应时通用。反应体系中用1 IV的Taq酶可获得良好的扩
增效果。扩增反应程序: 变温设置范围为90～95℃; 在IDAHO型PCR仪上扩增
, 变性时间1 s可满足变性需要; 在PE型PCR仪上取30 s。采用的Taq酶最适延
伸温度为70～75℃, 一般为72℃, 延伸时间60 s, RAPD反应的退火温度为30
～45℃, 退火时间30 s。镁离子浓度20 mmol/L和30 mmol/L时扩增结果理想
。模板浓度在5～20 ng为宜。用20个碱基长度引物对杨树RAPD分析, 退火温
度比10碱基引物退火温度提高8℃, 碱基长度变化不大, 退火温度不需调整。
图3参7