濒危药用植物厚朴ISSR引物筛选及反应条件的优化

编号 zgly0001353775

文献类型 期刊论文

文献题名 濒危药用植物厚朴ISSR引物筛选及反应条件的优化

作者 于华会  杨志玲  杨旭  谭梓峰  舒枭 

作者单位 中国林业科学研究院亚热带林业研究所  云南农业大学 

母体文献 生态学杂志 

年卷期 2009年12期

年份 2009 

分类号 S567.11 

关键词 厚朴  正交设计  引物筛选  ISSR 

文摘内容 以厚朴DNA为模板,利用正交试验分别对影响厚朴ISSR-PCR反应的Taq酶浓度、dNTP浓度、引物浓度、Mg2+浓度、模板DNA浓度进行了优化,并通过梯度PCR确定不同引物的最佳退火温度和循环次数,最终确定厚朴最佳反应体系及扩增条件为:25μl体系,其中包括1.5mmol.L-1MgCl2,0.3μmol.L-1引物,0.04U.μl-1Taq酶,0.2mmol.L-1dNTP,4ng.μl-1模板DNA,1×Buffer;扩增程序:94℃预变性5min,94℃变性30s,50℃～60℃(退火温度随引物不同而定)退火45s,72℃延伸90s,共40个循环,然后72℃延伸8min,4℃终止反应。此外,还利用优化的反应体系成功筛选出21条ISSR引物,并利用部分引物对厚朴个体进行了遗传多样性分析。