产单核细胞李斯特菌溶血素O单克隆抗体的制备与鉴定

编号 zgly0001376386

文献类型 期刊论文

文献题名 产单核细胞李斯特菌溶血素O单克隆抗体的制备与鉴定

作者 孔德壮  张衍海  龚振华  李葳  郑增忍  李玉清  张彦明 

作者单位 西北农林科技大学动物医学院  中国动物卫生与流行病学中心 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2010年07期

年份 2010 

分类号 Q789 

关键词 产单核细胞李斯特菌  李斯特菌溶血素O  单克隆抗体 

文摘内容 【目的】制备抗产单核细胞李斯特菌溶血素O(LLO)的特异性单克隆抗体。【方法】用LLO重折叠的原核表达产物LLO-his免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞,与骨髓瘤细胞在PEG4000作用下融合,经间接ELISA法筛选、多克隆及单克隆分离出阳性细胞株后,再用体内诱生腹水法大量制备单克隆抗体。用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体,间接ELISA法测定其效价及相对亲和常数;用HBT单克隆抗体亚类鉴定试剂盒鉴定抗体亚型;常规方法制备染色体,观察细胞株染色体数目及标志染色体;Western blot检测抗体的特异性。【结果】获得了2株稳定分泌抗LLO单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为3F5-G3和2B4-C8,其腹水效价分别为1∶(1×105)和1∶(1×107);染色体分别为97±5和93±8条,且观察到标志染色体;相对亲和常数分别为0.49和0.26μg/mL;抗体亚类均为IgG1,轻链均为κ链。特异性鉴定结果表明,2种单克隆抗体均可与LLO蛋白发生特异性反应,而与载体蛋白不发生反应。【结论】获得了抗LLO的特异性单克隆抗体。