家蚕滞育生物钟蛋白质EA4基因的cDNA克隆和序列分析

编号 zgly0001322525

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕滞育生物钟蛋白质EA4基因的cDNA克隆和序列分析

作者 王玉军  徐世清  司马杨虎  吴阳春  刘莹  柳学广  丛海峰 

作者单位 苏州大学生命科学学院  苏州大学生命科学学院 苏州215123  苏州215123 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2007年01期

年份 2007 

分类号 S881.26 

关键词 家蚕  滞育  时间间隔测定酶  酯酶A4基因  cDNA序列 

文摘内容 家蚕滞育生物钟是依赖卵内酯酶A4(EA4)的倒计时型生物钟。EA4是具时间间隔测定酶(time interval measuring enzyme,TIME)功能的蛋白质。根据家蚕EA4测定的氨基酸序列,以第3天龄雌蛹脂肪体和卵巢总RNA为模板,利用简并引物RT-PCR方法,得到308 bp的部分ea4序列,其1-144 nt和145-308 nt分别与家蚕全基因组鸟枪序列(whole genome shotgun sequence,WGS)AADK01019126.1的5595-5738 nt及WGS AADK01014467.1的8636-8473 nt有95%和98%的一致性。根据获得的ea4基因片段序列,利用生物信息学方法和家蚕基因组数据预测了ea4基因的完整cDNA序列,设计特异引物,以雌蛹脂肪体和卵巢RNA为模板,进行RT-PCR得到完整的cDNA。ea4基因的cDNA全长519 bp,其中1-48 bp为信号肽序列,49-519 bp编码的氨基酸与蛋白质纯化后测序EA4部分的一致性为98%,C末端存在3个氨基酸的差异,其中第156位为新确定氨基酸。