皱纹盘鲍外套膜耐维生素E缺乏消减cDNA文库的构建

编号 zgly0000504175

文献类型 期刊论文

文献题名 皱纹盘鲍外套膜耐维生素E缺乏消减cDNA文库的构建

作者 刘晶  张文兵  麦康森  付京花  冯秀妮  马洪明  徐玮  刘付志国 

作者单位 中国海洋大学教育部海水养殖重点实验室 

母体文献 中国水产科学 

年卷期 2007,14(3)

页码 383-389

年份 2007 

分类号 Q959.215 

关键词 皱纹盘鲍  外套膜  维生素E  抑制消减杂交  cDNA消减文库 

文摘内容 为了克隆维生素E缺乏时皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)外套膜差异性表达的基因, 本研究配制了维生素E缺乏水平(3.5mg/kg)和正常添加水平(52.8mg/kg)的人工饲料, 喂养皱纹盘鲍幼鲍, 初始体质量为(0.71±0.00)g, 初始壳长为(15.49±0.04)mm, 240d后, 采用抑制消减杂交法(Suppression Subtractive Hybridization, SSH)构建了维生素E缺乏组与正常组外套膜组织差异表达的cDNA消减文库。经检验, 差异表达的基因均被富集了2^5～2^8倍, 证明构建的cDNA消减文库具有很强的消减效率。从文库中随机挑取100个白色克隆摇菌液进行PCR鉴定, 95%的克隆中均有100-900bp的插入片段, 这些片段可能是维生素E缺乏差异表达基因的cDNA片段。选取含插入片段大小不同的48个克隆测序, 其中有16个新基因, 10个谷胱甘肽转移酶的基因, 5个谷胱甘肽过氧化物酶基因, 2个过氧化氢酶基因, 3个羟基类固醇脱氢酶基因, 4个酪氨酸激酶基因, 1个类甲状腺过氧化物酶蛋白基因, 3个纤维素酶基因, 1个cAME效应元件结合蛋白基因, 3个贝壳生物矿化相关蛋白的基因。总的来说, 利用抑制消减杂交的方法构建差异表达cDNA文库, 可以比较好地反映维生素E对皱纹盘鲍影响的基因信息, 为研究其他营养素对皱纹盘鲍基因表达的影响提供了基础数据。