利用质谱分析法从酶谱鉴定嗜热真菌木聚糖酶

编号 zgly0000822305

文献类型 期刊论文

文献题名 利用质谱分析法从酶谱鉴定嗜热真菌木聚糖酶

作者 吴亚宁  刘刚  余少文  李水明  王娟 

作者单位 深圳大学生命科学学院 

母体文献 食品研究与开发 

年卷期 2013(17)

页码 116-120

年份 2013 

分类号 TS749.2 

关键词 质谱  酶谱  11家族木聚糖酶  嗜热踝节菌  进化分析 

文摘内容 通过对前期筛选到的一株嗜热真菌Ta!aromycesthermophilusWYN9进行产木聚糖酶的诱导和非诱导培养。诱导培养的上清液中可以检测到木聚糖酶酶活。在非变性胶和变性胶SDS—PAGE中, 诱导和非诱导的酶谱条带差异明显。以非诱导酶谱为对照, 将诱导酶谱中与其有显著差异的条带切下, 回收蛋白, 测定酶活。将有木聚糖酶酶活的蛋白通过SDS—PAGE进一步分离纯化, 切胶后使用胶内酶切法进行预处理, 使用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI—TOF)进行分析。结果表明该蛋白与拟青霉属Paecilomycessp.J18的内切木聚糖酶高度同源。根据质谱分析结果设计兼并引物, 通过交错式热不对称PCR(thermalasymmetricinterlacedPCR, TAIL～PCR)扩增, 获得了TtXynA基因全长。根据Kimura双参数模型用临近相邻法构建了TtXynA及其同源蛋白的进化树。