布鲁菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白DK63-887基因缺失株的构建及鉴定

编号 zgly0001516860

文献类型 期刊论文

文献题名 布鲁菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白DK63-887基因缺失株的构建及鉴定

作者 江雅丽  陈创夫  李志强  李默  李爽  王震  张欢  张辉  郭飞 

作者单位 新疆石河子大学生命科学学院  新疆石河子大学动物科技学院  新疆石河子大学医学院 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2016年05期

年份 2016 

分类号 S852.614 

关键词 布鲁菌  DK63-887基因  缺失株  自噬相关基因 

文摘内容 为了构建羊布鲁菌16M(简称16M)的DK63-887基因缺失株(16MΔDK63-887),探讨该基因与16M介导自噬的关系。利用同源重组和抗性替换的方法,以卡那基因替换DK63-887基因,获得突变株16MΔDK63-887。将亲本株16M、疫苗株M5-90、突变株16MΔDK63-887在相同条件下振荡培养,观察其生长趋势变化;将各菌株置于不同外界环境中,观察其生存率;将各菌株侵染小鼠巨噬细胞,比较它们在宿主细胞内的生存能力及RT-qPCR检测自噬相关基因的表达。成功获得了布鲁菌DK63-887基因缺失株且在20代内未发生回复性突变现象。与亲本株相比,16MΔDK63-887在体外培养生长趋势与亲本株相似,只是细菌的浓度存在一定差异;突变株在外界应激条件下生存能力低于亲本株;侵染4h后缺失株胞内细菌数量明显下降;RT-qPCR检测到突变株的ULKI、Beclin1表达量均显著降低(P<0.01),结果表明,布鲁菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白与16M介导的细胞自噬密切相关,为16M胞内寄生机制的研究奠定了基础。