转宿主粘虫颗粒体病毒(PuGV-Ps)增效蛋白基因的克隆表达及活性

编号 zgly0001447659

文献类型 期刊论文

文献题名 转宿主粘虫颗粒体病毒(PuGV-Ps)增效蛋白基因的克隆表达及活性

作者 徐健  赵松  刘琴  杨青  李传明 

作者单位 江苏里下河地区农业科学研究所  江苏省血吸虫病防治研究所  中国科学院动物研究所 

母体文献 中国生物防治学报 

年卷期 2013年03期

年份 2013 

分类号 S476.13 

关键词 转宿主粘虫颗粒体病毒  增效蛋白  克隆表达  生物测定 

文摘内容 以东方粘虫为转宿主增殖的颗粒体病毒(PuGV Ps)DNA为模板通过PCR反应扩增出一条2.7 kb的特异性基因片段,纯化的PCR产物克隆到载体质粒pET 15b中,构建重组质粒pET 15b En,重组质粒外源基因测序证明PCR扩增产物是粘虫颗粒体病毒转宿主病毒PuGV Ps增效蛋白的全长基因。与原始美洲粘虫颗粒体病毒(PuGV)增效蛋白基因的序列比较,两者同源性达99.59%。11个突变碱基中有7个集中在5′端下游500 bp,而3′端上游500 bp仅1个碱基发生突变。PuGV Ps增效蛋白基因重组质粒pET 15b En转化到大肠杆菌中构建重组菌,在IPTG诱导下表达了108 kD的表达产物,Ni2+柱纯化证明表达产物是目标增效蛋白。LB培养液中加入0.2%的葡萄糖后有利于增效蛋白基因的表达。生物测定结果表明,粗提的表达产物具有增效活性,可以提高Btδ内毒素对棉铃虫、甜菜夜蛾的敏感性。