桦褐孔菌酸性蛋白酶的基因克隆及其在菌核中的表达

编号 zgly0001638647

文献类型 期刊论文

文献题名 桦褐孔菌酸性蛋白酶的基因克隆及其在菌核中的表达

作者 李健  王鑫  胡志强  亢学平  杜忠伟  王旭  陈艳秋 

作者单位 延边朝鲜族自治州农业科学院 

母体文献 食用菌学报 

年卷期 2018年02期

年份 2018 

分类号 S567.3 

关键词 大肠杆菌重组蛋白  桦褐孔菌  ELISA法  WesternBlotting检测 

文摘内容 根据桦褐孔菌(Inonotus obliquus)酸性蛋白酶(Acid protease,AP)基因(IO-AP)序列密码子的偏好性优化选择酶切位点和载体,成功构建pGEX-4T1-IO-AP原核表达载体;用热激法将该载体转化到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,构建桦褐孔菌酸性蛋白酶(IO-AP)重组菌。以此重组菌表达的IO-AP以包涵体形式存在,重组蛋白分子质量约为60kDa。以获得的较高纯度的重组IO-AP作为免疫原,采用传统3-2-2-2免疫方式免疫4只Balb/c小鼠,通过间接ELISA法测定抗血清效价,4免之后,4只小鼠抗血清效价均大于121500,成功制备了IO-AP多克隆抗体。Western Blotting检测表明,IO-AP在桦褐孔菌菌核形成过程中的表达呈现先上升后下降的趋势,以第二个时期(栽培130d,菌核长至1.33g时)AP蛋白表达量最高。