黄灯笼辣椒eIF4Es基因克隆及其酵母双杂交激活域载体构建

编号 zgly0001528944

文献类型 期刊论文

文献题名 黄灯笼辣椒eIF4Es基因克隆及其酵母双杂交激活域载体构建

作者 张真  余乃通  王健华  张秀春  武亚丹  刘志昕 

作者单位 中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室  海南大学农学院 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2016年08期

年份 2016 

分类号 S436.418 

关键词 eIF4E家族  酵母双杂交  载体构建  自激活 

文摘内容 通过对辣椒全基因组数据库分析获得黄灯笼辣椒eIF4E基因家族的四个基因,设计两端带有Eco RⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物分别扩增四个基因的ORF,克隆到LexA-酵母双杂交系统的激活域载体pB42AD中,并构建pB42AD-eIF4E、pB42AD-eIF(iso)4E、pB42AD-eIF4E-Xm、pB42AD-n CBP9090重组载体。将重组质粒导入酵母菌株EGY48(p8op-Lac Z)中,进行重组激活域载体的毒性检验和自激活验证。结果表明,扩增获得了正确的黄灯笼辣椒Cc-eIF4E、Cc-eIF(iso)4E、Cc-eIF4E-Xm、Cc-n CBP9090基因ORF,并成功克隆到pB42AD载体中,同时转化有激活域载体的EGY48(p8op-Lac Z)在SD/-Trp/-Ura营养缺陷型平板上生长良好,在SD/-His/-Ura平板上不生长,说明重组质粒表达产物对该酵母细胞无毒性,对下游报告基因无自激活作用。本研究结果证明pB42AD-eIF4E、pB42AD-eIF(iso)4E、pB42AD-eIF4E-Xm、pB42AD-n CBP9090重组载体可用于该系统的互作蛋白筛选,为下一步通过酵母双杂交系统筛选与黄灯笼辣椒eIF4E家族蛋白相互作用的病毒蛋白奠定基础。