月季丁香酚合成酶基因RhEGS1的克隆及表达分析

编号 zgly0000797075

文献类型 期刊论文

文献题名 月季丁香酚合成酶基因RhEGS1的克隆及表达分析

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 晏慧君  张颢  蹇洪英  王其刚  邱显钦  张婷  唐开学 

作者单位 云南省农业科学院花卉研究所/云南省花卉育种重点实验室 

母体文献 中国农业科学 

年卷期 2012,45(3)

页码 590-597

年份 2012 

分类号 Q943.2 

关键词 月季  丁香酚合成酶基因  RT-PCR  Gateway克隆  原核表达 

文摘内容 【目的】克隆月季丁香酚合成酶基因RhEGSI的全长cDNA序列, 分析其序列及表达特征, 并对该基因编码的蛋白进行原核表达分析, 为深入探讨丁香酚合成酶的生化特性奠定基础。【方法】根据已发表的其它植物EGS基因序列的保守结构域设计简并引物, 结合RACE技术, 获得RhEGS1的全长eDNA序列, 并进行生物信息学分析; 利用半定量RT-PCR对不同组织及不同花发育时期RhEGSI进行表达分析。采用Gateway克隆技术, 构建原核表达载体, 并进行原核蛋白表达。【结果】月季RhEGS1的eDNA全长为I207bp, 包含一个927bp的ORF, 编码309个氨基酸。同源序列比对发现RhEGS1与仙女扇的CbEGS2有83.87%的同源性, 与矮牵牛PhEGS1具有81.55%同源性。表达谱分析表明, RhEGS1主要在雄蕊中表达, 且在花盛开期表达最强, 而在花蕾期及凋谢期表达较弱。原核表达分析发现, 在37℃、0.5mm01·L-1IPTG诱导4h后, 携带RhEGS1ORF的原核表达载体在大肠杆菌中生成了大量的分子量约为35kD的蛋白质, 其分子量大小与预测的理论值相一致。【结论】从月季雄蕊中克隆到丁香酚合成酶基因RhEGS1, 具有EGS基因的结构特征和完整的编码框, 且在盛开期雄蕊中表达量最高。