家蚕微孢子RAD51基因的克隆、原核表达与体外翻译

编号 zgly0001265902

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕微孢子RAD51基因的克隆、原核表达与体外翻译

作者 高永珍  黄可威  常智杰 

作者单位 中国农业科学院蚕业研究所  清华大学生命科学与技术系 镇江212018  镇江212018 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2003年01期

年份 2003 

分类号 S884 

关键词 家蚕微孢子  RAD51基因  序列 

文摘内容 从家蚕微孢子 (Nosemabombycis)中通过RT PCR扩增出RAD5 1(DNArepairprotein)基因的 3′端部分序列 ,经5′ RACE(RapidAmplificationofcDNAEnds)后得到全长cDNA序列 ,共 10 0 2bp ,编码 334个氨基酸。虽然用NorthernBlot检测不出mRNA的特异性表达带 ,但用RT -PCR直接扩增出全长cDNA而证实了该基因。该cDNA已作为新基因提交到GenBank数据库中 ,登录号为AF0 3730 5。将该基因在大肠杆菌 (E .coli)中进行表达 ,得到表达量较高的分子量约 37ku的蛋白质 ,经亲和层析纯化后得到较浓的单一蛋白带 ,纯化效果较好。用兔网织红细胞裂解液在体外也翻译出该分子量为 37ku的蛋白质 ,进一步确证了该蛋白。通过BLAST查询GenBank数据库 ,发现它与许多生物体的RAD5 1同源性很高