薇甘菊乙醇酸氧化酶基因的克隆、序列分析和原核表达

编号 zgly0001392078

文献类型 期刊论文

文献题名 薇甘菊乙醇酸氧化酶基因的克隆、序列分析和原核表达

作者 李冬梅  彭少麟 

作者单位 广东省农业科学院花卉研究所  中山大学生命科学学院有害生物控制与资源利用国家重点实验室 

母体文献 植物研究 

年卷期 2010年04期

年份 2010 

分类号 Q943.2 

关键词 薇甘菊  乙醇酸氧化酶  基因克隆  序列分析  原核表达 

文摘内容 利用SSH和RACE相结合的方法获得了薇甘菊乙醇酸氧化酶基因cDNA全长,并对该序列进行了生物信息学分析。随后将该基因的cDNA编码区克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒,转化到大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)中进行表达。序列分析表明,薇甘菊乙醇酸氧化酶基因cDNA全长1363bp,编码369个氨基酸,命名为MmGO(GenBank登录号EU716626),推测的MmGO分子量为40.32kDa,等电点为8.99。系统进化分析表明,MmGO与芸苔的GO序列亲缘关系比较近。将该基因重组到pET-32a(+)中进行原核表达,经0.1mmol·L-1IPTG,25℃诱导4h,获得了具有较高表达水平的融合蛋白6×His-MmGO,Western-blot证实表达的6×His-MmGO能与抗6×His的单抗发生特异性反应,分子量约为60kDa,与预测的融合蛋白6×His-MmGO分子量相符。为进一步研究融合蛋白6×His-MmGO的活性和功能奠定了基础。