大头金蝇酰基辅酶AΔ9去饱和酶cDNA克隆与原核表达

编号 zgly0001655061

文献类型 期刊论文

文献题名 大头金蝇酰基辅酶AΔ9去饱和酶cDNA克隆与原核表达

作者 张敏  张古忍 

作者单位 南华大学生物化学与分子生物学教研室  中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室 

母体文献 环境昆虫学报 

年卷期 2018年06期

年份 2018 

分类号 Q966 

关键词 大头金蝇  酰基辅酶AΔ9去饱和酶  ACD9des  基因克隆  原核表达 

文摘内容 为深入研究大头金蝇Chrysomya megacephala (Fabricius)脂肪酸代谢关键功能基因酰基辅酶AΔ9去饱和酶(ACD9des),运用RT-PCR和RACE技术,获得其cDNA全长序列,并对其进行生物信息学分析。大头金蝇ACD9des基因cDNA (GenBank登录号为KF835695)全长1 429 bp,其中开放阅读框(ORF)为1 146 bp,编码381个氨基酸,5’UTR长度为138 bp,3’UTR约为114 bp。ORF编码的蛋白质分子量为43. 47 kD,等电点9. 06,氨基酸序列与其他昆虫酰基辅酶A去饱和酶一致性高达66%-93%,且含有由7个酰基辅酶A去饱和酶蛋白家族特有的保守模式(motif)所构成的指纹(IPR015876)。大头金蝇ACD9des在进化上与葱蝇Delia antiqua最趋于一致。将ACD9des的ORF克隆到原核表达载体p ET-44a(+),并利用Rosetta (DE3)感受态细胞进行ACD9des原核表达。Western Blot分析表明,IPTG诱导表达的特异性蛋白可以与anti-His抗体特异性结合,大小与预期理论值(43. 47 kDa)相符,为ACD9des。该蛋白主要存在于上清溶液中,为可溶性表达。最后利用含250 mM咪唑洗脱液和镍离子亲和层析柱对扩大培养获得的重组蛋白进行了纯化收集。本文的研究结果为大头金蝇功能基因的深入研究提供了坚实的基础。