扇棘单睾吸虫Real-time PCR与常规PCR检测方法的建立

编号 zgly0001487558

文献类型 期刊论文

文献题名 扇棘单睾吸虫Real-time PCR与常规PCR检测方法的建立

作者 李树清  梅雪芳  林颖峥  石云良  黄腾飞  王巧全  张强  陈志飞  宋青  唐智芳  黄维义 

作者单位 上海出入境检验检疫局  广西大学动物科学技术学院  广西大学食品质量与安全研究中心  罗氏诊断产品(上海)有限公司 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2015年12期

年份 2015 

分类号 S852.7 

关键词 扇棘单睾吸虫  实时荧光定量PCR  常规PCR  鉴定 

文摘内容 根据扇棘单睾吸虫核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)序列,应用Primer premier 5.0软件自行设计一对可同时应用于real-time PCR和常规PCR的特异引物,建立real-time PCR与常规PCR鉴定扇棘单睾吸虫的方法,评估其特异性及灵敏性。应用建立的方法鉴定犬猫内脏中收集的吸虫,并用测序进行验证,检验方法的准确性和实用性。结果表明,建立的两种方法均只能特异性扩增扇棘单睾吸虫目的片段,不与横川后殖吸虫、钩棘单睾吸虫、华支睾吸虫、瓦氏瓦特松吸虫、棘口属吸虫、背孔属吸虫、心形咽口吸虫、野牛平腹盘吸虫、东方次睾吸虫、卫氏并殖吸虫、异尖属线虫、宫脂属线虫发生交叉扩增;敏感性试验表明,real-time PCR和常规PCR检测扇棘单睾吸虫质粒的最低检测限分别为43拷贝和86拷贝。建立的realtime PCR标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(R2=0.998)。鉴定来自犬猫的吸虫17条,结果显示两种方法均能准确鉴定出扇棘单睾吸虫。