茶尺蠖小RNA病毒全长cDNA克隆的构建

编号 zgly0001381476

文献类型 期刊论文

文献题名 茶尺蠖小RNA病毒全长cDNA克隆的构建

作者 林美娟  谢键  张珈敏  叶姗  胡远扬 

作者单位 武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2010年07期

年份 2010 

分类号 S476.13 

关键词 茶尺蠖小RNA病毒  全长cDNA克隆  传染性软化病毒科  反向遗传学 

文摘内容 为了初步研究茶尺蠖小RNA病毒(Ectropis oblique picorna-like virus,EoPV)的复制机制,从被EoPV感染致死的茶尺蠖幼虫中分离并纯化病毒粒子,提取病毒RNA,根据已公布的EoPV核苷酸序列,利用基因组上单一的酶切位点,设计特异性引物,应用RT-PCR扩增出5个覆盖全长的片段。随后采用融合PCR将5个片段拼接,最终将全长定向克隆到低拷贝质粒载体上,成功构建cDNA全长克隆p-EoPV。双酶切及测序鉴定证明全长克隆构建成功。与原序列比较发现,该克隆在氨基酸水平上有8个突变和1个缺失。本研究为深入探讨EoPV病毒生物学特性、病毒复制机理等奠定了基础。