家蚕BmAWD基因的表达和蛋白纯化

编号 zgly0001361388

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕BmAWD基因的表达和蛋白纯化

作者 赵贤能  童富淡  蒋彩英  张耀洲 

作者单位 浙江理工大学生物化学研究所 

母体文献 蚕桑通报 

年卷期 2009年04期

年份 2009 

分类号 Q78 

关键词 家蚕  BmAWD基因  核苷二磷酸激酶  基因克隆  蛋白纯化 

文摘内容 家蚕BmAWD与家蚕翅膀发育密切相关,控制其翅膀发育的完整性及可用性。在对本实验室构建的家蚕蛹期cDNA文库测序中,我们筛选到一条编码AWD蛋白的cDNA序列,将其命名为BmAWD基因。通过生物信息学分析,发现该基因序列全长为689bp,ORF框为465bp,编码154个氨基酸残基,含有一个NDPK保守结构域。通过PCR扩增获得该基因ORF框并克隆到表达载体pGEX-5X-1上,得到重组表达质粒pGEX-5X-1-AWD,将该重组子转化大肠杆菌BL21,经PCR、酶切鉴定证明重组正确,在37℃下以IPTG诱导表达后收集菌体并裂解,SDS-PAGE分析发现在43kD左右处有一特异性蛋白条带,与预期值相符,但目的蛋白主要以沉淀即包涵体形式存在,25℃下诱导表达,SDS-PAGE分析表明目的蛋白主要存在于上清中。采用亲和层析法纯化融合蛋白GST-AWD,目的蛋白通过与层析柱上的GST磁珠结合而被纯化分离。