H5和H9亚型禽流感病毒反向斑点杂交同步检测法的建立

编号 zgly0001392962

文献类型 期刊论文

文献题名 H5和H9亚型禽流感病毒反向斑点杂交同步检测法的建立

作者 王伟  薛强  邹明强  柴同杰  田甜 

作者单位 山东农业大学动物科技学院  中国检验检疫科学研究院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2010年04期

年份 2010 

分类号 S855.3 

关键词 反向斑点杂交  H5、H9亚型禽流感病毒  血凝素  灵敏性  稳定性 

文摘内容 【目的】建立H5和H9亚型禽流感病毒的反向斑点杂交鉴别诊断方法。【方法】在H5和H9亚型禽流感病毒血凝素基因的保守区段内,选择设计2对引物,RT-PCR扩增后将目的片段克隆到pGEM-T载体中,得到重组质粒pGEM-T-H5与pGEM-T-H9。以重组质粒为模版,选择合成寡核苷酸探针与生物素标记引物。将探针通过紫外交联方法固定在带正电荷的尼龙膜上,用生物素标记引物扩增特异性片段,扩增产物经热变性后与探针进行杂交,杂交后显色,出现明显蓝紫色斑点的判定为阳性,无斑点判定为阴性。【结果】利用建立的反向斑点杂交方法检测,H5、H9亚型禽流感病毒的血凝效价分别可达到2-9.6和2-11.9,杂交特异性好,且2亚型间无交叉反应。【结论】建立了H5和H9亚型禽流感病毒的反向斑点杂交检测方法,该方法灵敏度高、特异性好,可以实现H5与H9亚型禽流感病毒的鉴别诊断。